一、MALDI-TOF Ms的技术原理

样本与小分子基质溶液混合溶剂挥发后，形成共结晶，在激光辐射下，基质吸收能量将电荷转移给样本分子，形成离子化的样本。离子化的样本在电场作用下飞过飞行管道，离子的m/z与离子成正比，不同质量的离子因到达检测器飞行时间的时间不同，形成不同的质量图谱。

不同病原微生物拥有不同的蛋白组成，MALDI-TOF MS检测不同病原微生物蛋白质组分得到特异的蛋白峰图谱，与MALDI-TOF MS数据库进行比对后得到鉴定结果。该技术可用于多肽、蛋白、微生物鉴定以及SNP基因检测等领域。

二、微生物质谱在微生物鉴定上应用的优势

微生物质谱在微生物鉴定上有显著的优势：该技术准确率高；检测速度快，可在1min内完成微生物菌株的鉴定；检测范围广，鉴定菌株类别可达2000多种涵盖需氧菌、厌氧菌、分枝杆菌、酵母菌、丝状真菌、支原体等；可开展前沿性研究，如进行蛋白、核酸、病毒、耐药等研究。

三、质谱检测流程

四、鉴定结果解读

真高分值：细菌鉴定得分在9.0以上，丝状真菌得分在6.0以上，且鉴定结果明细较一致。

假高分值：菌株鉴定得分较高，但鉴定结果明细一致性较低，主要由于有些菌株蛋白指纹图谱特征峰非常相似，从而无法区分的菌株，如大肠与志贺、阴沟肠杆菌与阿氏肠杆菌等，用户可根据有无临床意义判断是否有必要用补充实验做进一步验证。

假低分值：细菌得分区间在9.0以下 ，丝状真菌得分区间6.0以下，如一些难破壁菌株，丝状真菌、革兰阳性杆菌等，鉴定结果明细里10个结果一致性较高，则种/属水平可信。

真低分值：原因可能有混合菌、蛋白图谱特征峰缺失或峰数量过多或过少，造成谱图峰与标准库中谱图多种菌匹配；或数据库中没有收录该菌，少数菌可能由于与其他近似菌匹配。

五、总结

鉴定得分值与蛋白指纹图谱质量密切相关，图谱质量（峰的个数、信号强度、分辨率等）不好，会导致鉴定速度慢、鉴定分值低。对于菌量过多或过少（个别样品点分值较低）以及点样不均匀（个别样品点分值较低）引起的鉴定分值低，可手动打样进行鉴定或者重新点样，或者改变前处理方法。对于基质结晶差（所有的样品都受到同样的影响，可观察基质管中是否有固体析出）引起的鉴定分值低，可重新加基质液覆盖干燥检测，或者重新配备基质液。另外如果长期不校准仪器，也会导致检测到的图谱峰越来越不精确，进一步造成鉴定分值越来越低。

作者：郑州大学第一附属医院 检验科 郭萍

专业审核：《健康河南》编辑部

编辑：门靖狄

校对：张红改

终审：高   明

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